产品组成:
25T | 50T | 保存条件 | |
6% SDS-PAGE 分离胶预混液 | 200mL | 200mL×2 | 4℃,避光 |
5% SDS-PAGE 浓缩胶预混液 | 100mL | 100mL | 4℃,避光 |
PAGE胶凝固剂 | 1g | 2g | 干粉4℃;溶液-20℃ |
PAGE胶促凝剂 | 0.8mL | 1.5mL | 4℃,避光 |
产品说明:
本试剂盒提供了简单而又超快速地配制6% SDS-PAGE凝胶(即SDS聚丙烯酰胺凝胶)所需的所有试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制6% SDS-PAGE凝胶。
本试剂盒把SDS-PAGE凝胶配制所需的Tric-HCl、Acr-Bis(29:1)、SDS等预混合成下层胶预混液和上层胶预混液,使用前仅需加入适量10%PAGE胶凝固剂和PAGE胶促凝剂即可简单快速地完成下层胶(分离胶)和上层胶(堆积胶)的配制。
本试剂盒约可配制25/50块常规大小的6% SDS-PAGE凝胶。具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。
操作步骤(仅供参考):
1、10%PAGE 胶凝固剂配置方法,取 0.1g PAGE 胶凝固剂加入 1mL 蒸馏水,待其完全溶解,即为 10%PAGE胶凝固剂。
2、在 6% SDS-PAGE 分离胶预混液,按照 1%的比例加入相应量的 10%过硫酸铵或其替代物溶液,按照 0.01%的比例加入相应量的 TEMED。例如 10ml 6% SDS-PAGE 下层胶预混液中,加入 100μl 10%过硫酸铵或其替代物溶液和 10μl TEMED 或其替代物溶液。适当混匀后倒入到制胶模具中,用异丙醇或蒸馏水封住液面,直至下层胶凝固充分。
3、去除分离胶上面覆盖的液体,尽量去干净,然后倒入添加了 10%PAGE 胶凝固剂溶液和 PAGE 胶促凝剂的 5%SDS-PAGE 上层胶预混液,插入梳子,待上层胶凝固后,则表明制胶步骤结束,可以准备进行后续的电泳了。通常 30-60 分钟内胶会凝固。具体的凝固时间和温度及光照有关。(参考下表)。
成分 | 配制不同体积分离胶预混液所需各成分的体积 ( mL) | |||||
6%SDS-PAGE 分离胶预混液 | 5 | 10 | 15 | 20 | 30 | 50 |
10%PAGE胶凝固剂 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
PAGE胶促凝剂 | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 | 0.03 | 0.05 |
成分 | 配制不同体积浓缩胶预混液所需各成分的体积 ( mL) | |||||
5%SDS-PAGE 浓缩胶预混液 | 2 | 5 | 10 | 20 | 30 | 50 |
10%PAGE胶凝固剂 | 0.02 | 0.05 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
PAGE胶促凝剂 | 0.002 | 0.005 | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.05 |
注意事项:
1、在冬天室温较低时,可以自行再额外添加少量TEMED 以促进凝胶凝固;也可将胶放37℃温箱凝固。
2、SDS-PAGE 分离胶预混液中含有SDS,若低温放置出现沉淀,可使溶液恢复室温后,待沉淀溶解后再使用。
3、PAGE 胶促凝剂和10%PAGE 胶凝固剂最后加,在加入前需混匀前面所加试剂。10%PAGE 胶凝固剂溶液在4℃有效期为一周;PAGE 胶促凝剂易挥发,使用后请盖紧瓶盖。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
备注:以上数据均来自公开文献, 仅供参考